Condições ideais de pH e temperatura para a atividade da NTP dase em linfócitos de pacientes imunodeprimidos pela infecção causada pelo HIV

Abstract

A NTPDase (ecto-apirase, ecto-difosfoidrolase, CD39, EC 3.6.1.5) é uma enzima identificada como antígeno de superfície de células linfóides, cuja maior expressão leva a um aumento da hidrólise do ADP e ATP nessas células. O objetivo, neste trabalho, foi caracterizar a enzima NTPDase em linfócitos de pacientes imunodeprimidos pela infecção causada pelo HIV, determinando condições ideais in vitro para sua atividade. As amostras utilizadas foram provenientes de pacientes HIV-positivos atendidos no ambulatório de Doenças Infecciosas do Hospital Universitário de Santa Maria. Os linfócitos foram isolados de sangue total coletado com EDTA e separados em Ficoll-Hystopaque em gradientes de densidade. As amostras foram incubadas tendo ATP e ADP como substratos e a atividade enzimática determinada medindo a liberação de fosfato inorgânico através de ensaio colorimétrico, com verde de malaquita como reagente. Em linfócitos de pacientes HIV positivos, observou-se uma atividade máxima da enzima em temperatura de 37ºC e pH 8,0 tanto na hidrólise de ATP como na hidrólise de ADP.