Técnica de PCR Simplex associada a método de extração de DNA de baixo custo para identificação molecular de isolados clínicos de Shigella SPP

Abstract

Shigelose é uma doença entérica responsável por 1,1 milhões de mortes anualmente, 60% destas representadas por crianças menores de 5 anos. Espécies de Shigella são encontradas em água e alimentos contaminados, sendo a rota de transmissão deste patógeno por meio do contato fecal-oral. O presente estudo visou a adaptar uma técnica molecular com vistas à identificação de casos clínicos de gastroenterite provocadas por Shigella spp. A cultura bacteriana do isolado clínico de S. sonnei LCL-01 foi submetida à extração de DNA genômico por meio do método de fenol-clorofórmio com modificações, submetendo o material genético resultante à técnica de PCR simplex. O procedimento de extração resultou em um DNA genômico de boa qualidade, obtendo-se fragmento de 615 pb após amplificação do gene ipaH. Dessa forma, viabilizou-se a identificação molecular de S. sonnei por meio da adaptação de uma metodologia in-house de baixo custo, baseada na utilização de fenol-clorofórmio como ferramenta para romper a parede celular bacteriana visando à extração de DNA genômico, a qual poderá auxiliar no rastreamento, detecção e tratamento de infecções causadas por S. sonnei