Técnica de PCR Simplex associada a método de extração de DNA de baixo custo para identificação molecular de isolados clínicos de Shigella SPP

Renata Zorzetto, Luana Carvalho Saraiva, Luana Costa, Taís Vidal Palma, Jéssica Carla Martins Couto, Letícia Maffi Augusti, Guilherme Teixeira Leal, Felipe Pinto de Quadros, Gabriela Murari Fernandes, Jenifer Kolling, André Nussbaumer, Carolina dos Santos Santini, Graziela Schuh, Michele Sagrilo, Bruno Stefanello Vizzotto

Resumo


Shigelose é uma doença entérica responsável por 1,1 milhões de mortes anualmente, 60% destas representadas por crianças menores de 5 anos. Espécies de Shigella são encontradas em água e alimentos contaminados, sendo a rota de transmissão deste patógeno por meio do contato fecal-oral. O presente estudo visou a adaptar uma técnica molecular com vistas à identificação de casos clínicos de gastroenterite provocadas por Shigella spp. A cultura bacteriana do isolado clínico de S. sonnei LCL-01 foi submetida à extração de DNA genômico por meio do método de fenol-clorofórmio com modificações, submetendo o material genético resultante à técnica de PCR simplex. O procedimento de extração resultou em um DNA genômico de boa qualidade, obtendo-se fragmento de 615 pb após amplificação do gene ipaH. Dessa forma, viabilizou-se a identificação molecular de S. sonnei por meio da adaptação de uma metodologia in-house de baixo custo, baseada na utilização de fenol-clorofórmio como ferramenta para romper a parede celular bacteriana visando à extração de DNA genômico, a qual poderá auxiliar no rastreamento, detecção e tratamento de infecções causadas por S. sonnei.

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